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HCPure?多模式層析填料,助力生物制品的高效純化

近年來(lái),生物制藥行業(yè)呈現出繁榮發(fā)展的趨勢,很多大分子生物制品已經(jīng)過(guò)監管部門(mén)批準上市,另有不少創(chuàng )新型大分子正處于臨床后期或上市前申報階段,即將為患者帶來(lái)福音。例如,基于CHO細胞表達的單克隆抗體、基于大腸桿菌(E.coli)體系表達的重組蛋白或納米抗體、基于HEK293細胞或昆蟲(chóng)細胞SF9表達的腺相關(guān)病毒(AAV)、基于酵母細胞表達的病毒樣顆粒(VLP)等。不同于傳統的小分子化學(xué)藥,生物大分子的表達體系更為復雜,雜質(zhì)種類(lèi)更多(如宿主蛋白(HCP)和宿主DNA殘留(HCD)等),雜質(zhì)結構相對復雜,這給下游純化帶來(lái)了極大的挑戰。 基于傳統微球技術(shù)的層析工藝是生物大分子純化的重要手段,其具有工藝性能穩定、放大性良好等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái),多模式層析填料受到越來(lái)越多的關(guān)注。多模式層析填料往往具備至少兩種相互作用機制,其中最常見(jiàn)的是將離子交換模式與疏水相互作用模式結合,可以在廣泛的pH和電導率范圍內有效純化目標分子。圖1. HCPureTM配基結構和作用方式 HCPureTM是英國Astrea Bioseparations公司2023年推出的多模式層析填料,填料基架為粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖,基架上修飾有化學(xué)合成的小分子配基(圖1),主要以疏水相互作用的方式結合料液中的雜質(zhì),同時(shí)兼具氫鍵相互作用模式(與市售主流產(chǎn)品作用原理不同,形成互補),適用于多種表達體系,在廣泛的上樣條件下,能穩健的去除料液中的HCP(宿主細胞蛋白)、HCD(宿主細胞DNA)、聚集體、分子片段等工藝或產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。表1展示了HCPureTM在常見(jiàn)的表達體系中雜質(zhì)去除能力。表1. HCPureTM在多種表達體系中的應用效果 1. HCPureTM在大腸桿菌(E. coli )表達體系中可以有效去除HCP在該應用案例中,研究人員使用大腸桿菌(E. coli )表達納米抗體Vκ,收獲液先經(jīng)過(guò)Protein L親和層析純化,洗脫液經(jīng)中和后調節成不同的pH(6.0-8.0)和電導率(6-18mS/cm),隨后以流穿模式上樣HCPureTM,收集流穿液和淋洗液,檢測Vκ和HCP的含量,以探究HCPureTM的最佳上樣條件。測試條件如下表所示: 圖2. E.coli表達體系中HCPureTM上樣pH和電導率的探究 由圖2的檢測結果可知,在較低的pH(6.0)和較低的電導率(6ms/cm)上樣條件下,HCP的去除效果最佳,同時(shí)目標分子Vκ的回收率最高。在最優(yōu)上樣條件下,料液中的HCP可以從30000ppm降至200ppm(2個(gè)log值的去除能力),Vκ回收率大于85%(表2)。表2. HCPureTM在E. coli 表達體系中可以有效去除HCP 2. HCPureTM在CHO細胞表達體系中可以有效去除HCP在該應用案例中,研究人員使用CHO細胞表達IgG型單克隆抗體,澄清后的收獲液先經(jīng)過(guò)Protein A親和層析純化,洗脫液經(jīng)中和后調節成不同的pH(4.0-9.0)和電導率(8-18ms/cm),再以流穿模式上樣到HCPureTM中,收集流穿液和淋洗液,檢測IgG和HCP含量,其中,pH 6.0、電導率12ms/cm是未經(jīng)調節的親和層析洗脫中和液。表3. CHO細胞體系中,不同上樣pH和電導率條件下,HCPureTM均可有效去除HCP 由表3的檢測結果可知,在廣泛的上樣pH和電導率范圍內,HCPureTM均可有效的去除上樣料液中的HCP(平均84%),同時(shí)保持目標分子的高回收率(平均87%)。此外,由于pH 6.0、電導率12mS/cm是初始的親和層析洗脫中和液,因此,親和層析后,料液可不經(jīng)過(guò)調整或緩沖液置換,直接上樣到HCPureTM中,同樣保持優(yōu)秀的回收率和HCP去除效果,且大大節約了工藝時(shí)間和成本。 3. HCPureTM在CHO細胞表達體系中可以有效去除聚集體在該應用案例中,研究人員使用CHO細胞表達IgG型單克隆抗體,料液經(jīng)過(guò)Protein A親和層析和陽(yáng)離子交換層析純化后,在較低的pH和較高的電導率條件下孵育,誘導產(chǎn)生高含量的聚集體,再以流穿模式上樣HCPureTM,收集流穿液和淋洗液,檢測聚集體含量。表4. HCPureTM可顯著(zhù)去除抗體料液中的聚集體 由檢測結果(表4)可看出,料液經(jīng)過(guò)HCPureTM純化后,聚集體由初始的6.7%降低到2.9%,HCPureTM可顯著(zhù)去除料液中的聚集體。 4. HCPureTM在HEK 293細胞表達體系中可以有效去除HCP在該應用案例中,研究人員使用HEK293細胞以瞬轉的方式表達2型腺相關(guān)病毒(AAV-2),病毒載體經(jīng)過(guò)親和層析純化后,仍含有較高含量的低分子蛋白雜質(zhì),將親和層析洗脫液置換到PBS+200mM NaCl(pH 7.5)中,以流穿模式上樣到HCPureTM(10mm內徑層析柱,柱高10cm),總上樣量為5.0E+13VP,收集流穿液和淋洗液進(jìn)行分析。圖3. SDS-PAGE檢測結果 表5. ELISA檢測結果 由SDS-PAGE結果(圖3)可看出,流穿液中包含大部分病毒衣殼蛋白VP1,VP2和VP3條帶(8-13泳道),而再生液(14泳道)中則包含大量的低分子蛋白雜質(zhì)條帶,表明HCPureTM可以有效去除料液中的蛋白雜質(zhì)分子。由ELISA檢測結果(表5)可知,流穿液中的病毒衣殼蛋白幾乎全部回收(接近100%),表明HCPureTM在去除蛋白雜質(zhì)的同時(shí)可以保持優(yōu)秀的AAV回收率。 HCPureTM多模式層析填料技術(shù)參數 HCPureTM多模式層析填料產(chǎn)品信息散裝填料 預裝柱 如您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎點(diǎn)擊這里填寫(xiě)信息,Astrea Bioseparations技術(shù)專(zhuān)家將為您提供個(gè)性化優(yōu)化方案,切實(shí)幫您解決純化工藝中的疑難問(wèn)題。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué),擁有超過(guò)30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,是世界級層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過(guò)21個(gè)生產(chǎn)工藝通過(guò)了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地,專(zhuān)注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù),解決了傳統生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問(wèn)題,實(shí)現更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過(guò)程,完全符合當今生物治療創(chuàng )新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中國區代理,為用戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎隨時(shí)撥打西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多信息。 參考文獻:J. Kreusser et al., Influence of pH value and salts on the adsorption of lysozyme in mixed-mode chromatography, 2021R. Hess et al., Standardized method for mechanistic modeling of multimodal anion exchange chromatography in flow through operation, 2023 Technical Note: HCPURE?: A FIT FOR PURPOSE HOST CELL PROTEIN CLEARANCE SOLUTION IN E. COLI WORKFLOWS, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPure? host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPure? host cell protein clearance resin: Mixed mode chromatography as a means of process intensification, Astrea BioseparationsTechnical Note: HCPURE?: HOST CELL IMPURITY REMOVAL IN CHO WORKFLOWS, Astrea BioseparationsTechnical User Guide: HCPureTM, Astrea Bioseparations 更多>

新品上市 | 耐高鹽全能核酸酶DENARASE? High Salt

DENARASE&reg; High Salt 是一種經(jīng)過(guò)生物工程改造的野生型 Serratia marcescens 內切酶,通常用于生物工藝中的 DNA 去除。與野生型 DENARASE&reg; 相比,該酶的幾個(gè)氨基酸被替換以提高其耐鹽性,而不會(huì )失去其對核酸的特異性。DENARASE&reg; High Salt 在更廣泛的鹽濃度和 pH 范圍內保持更高的活性,為客戶(hù)提供了更大的工藝靈活性,同時(shí)為病毒載體制造工藝提升成本效益,尤其是在需要較高鹽濃度的條件下。由于與野生型核酸內切酶具有很高的相似性,DENARASE&reg; High Salt 可以使用與野生型酶相同的核酸內切酶 ELISA試劑盒進(jìn)行檢測,例如DENARASE&reg; ELISA試劑盒,Cygnus核酸內切酶殘留檢測試劑盒(EonucleaseGTP ELISA,貨號F960)。 DENARASE&reg; High Salt的生產(chǎn)采用c-LEcta成熟的專(zhuān)利DENARASE&reg;生產(chǎn)工藝,該工藝采用革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌菌株(Bacillus.sp.)表達,大大降低了內毒素殘留風(fēng)險。該酶按照ISO 9001標準生產(chǎn),不使用抗生素和動(dòng)物源性原料或TSE/BSE風(fēng)險原料。 DENARASE&reg; High Salt酶特性 DENARASE&reg; High Salt是專(zhuān)為在更高、與工藝相關(guān)的鹽濃度下實(shí)現DNA清除活性而設計的。該工程酶在0-500 mM一價(jià)陽(yáng)離子濃度范圍內具有活性(見(jiàn)圖1)。 圖1. NaCl對酶活性影響 鎂離子(Mg2+)是確保DENARASE&reg; High Salt發(fā)揮酶活性所必需的輔因子。DENARASE&reg; High Salt在低鎂離子濃度(5-25 mM Mg2+)下具有基本活性,但在高鎂離子濃度(>25 mM Mg2+)下酶活性會(huì )降低。因此,在使用DENARASE&reg; High Salt時(shí),應確保鎂離子濃度在適當范圍內(見(jiàn)圖2)。 圖2. Mg2+對酶活性影響 DENARASE&reg; High Salt質(zhì)量參數 DENARASE&reg; High Salt產(chǎn)品為液體形式,配方為20 mM Tris-HCl(pH 7.4±0.2)、250 mM NaCl、5 mM MgCl2和50%(體積比)甘油。 項目 方法 質(zhì)量標準 產(chǎn)品性狀 直接觀(guān)測 澄清透明液體 酶活性 光學(xué)測定1 >250 U/µL 純度 SDS-PAGE和銀染 ≥ 99% 比活性 光學(xué)測定單位蛋白具有的酶活性即280 nm下44,600 L x mol-1 x cm-1的摩爾消光系數 >5 x 105 U/mg 內毒素 LAL-Test,參考 Ph. Eur. 2.6.14, 方法C <0.25 EU/kU 總菌落數 TAMC/TYMC 參照 Ph. Eur. 2.6.12 需氧菌: < 5 cfu/200 µL 酵母: < 5 cfu/200 µL 1. Unit定義: 每個(gè)活性單位 (U) 是指在37 °C ,pH 8.0 條件下,在30分鐘內將鮭魚(yú)精DNA消化至相當于ΔA260nm值為1.0 的酸溶性寡聚核苷酸。 DENARASE&reg; High Salt產(chǎn)品參數 分子量: 27 kDa 最適pH: pH 7.4 - 9.0 最適反應溫度:37 °C 等電點(diǎn)(pI):7.831 輔因子:Mg2+ DENARASE&reg; High Salt訂購信息 品名 貨號 規格 DENARASE High Salt 25 kU 22002-25k 25 kU DENARASE High Salt 100 kU 22002-100k 100 kU DENARASE High Salt 500 kU 22002-500k 500 kU DENARASE High Salt 1000 kU 22002-1000k 1000 kU DENARASE High Salt 5000 kU 22002-5000k 5000 kU 關(guān)注西美杰微信公眾號(微信號:xmjsci),回復“核酸酶試用”,填寫(xiě)表單即可申請c-LEcta DENARASE&reg; High Salt免費試用機會(huì ),數量有限,先到先得! 如需了解更多信息,歡迎致電c-LEcta中國區代理北京西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.mm2332.com獲取更多資料。 更多>

星品推薦 | Agrisera植物通用抗體(Global antibodies)

通用抗體(Global antibodies)是Agrisera公司針對植物蛋白中保守的氨基酸序列設計的一系列抗體。這些抗體的顯著(zhù)優(yōu)勢在于它們能夠跨不同物種準確識別目的蛋白,并且可以通過(guò)標準品實(shí)現對蛋白的精確定量分析,這些抗體具備廣泛的適用性,能夠檢測包括高等植物、苔蘚、藻類(lèi)以及硅藻在內的多物種中的相同蛋白。無(wú)論是在標準品還是待測樣本中,這些抗體都能一致識別特定蛋白區域,從而確保實(shí)驗結果的高可靠性和準確性,為研究人員提供極為方便的選擇。通用抗體的應用 ? 從一系列來(lái)源,包括藍藻,浮游植物或未表征的植物中檢測目的蛋白 ? 從不同光合水平來(lái)源的浮游植物群落的光合蛋白混合樣本中檢測環(huán)境適應性 ? 預測群落中主要光合作用和生物合成過(guò)程的最大能力 Agrisera部分通用抗體產(chǎn)品 產(chǎn)品名稱(chēng) 貨號 實(shí)驗類(lèi)型 AOX1/2 | Plant alternative oxidase 1and 2 AS04 054 IL,WB AtpB | Beta subunit of ATP synthase AS05 085-10 IF,WB Cat | Catalase (peroxisomal marker) AS09 501 IL,IG,IP,WB FtsZ2 | Plant cell division proteinftsZ2 AS13 2651 WB GLN1 GLN2 | GS1 GS2 glutaminesynthetase global antibody AS08 295 WB GlnA | Glutamine synthetase AS01 018 WB GOGAT | Glutamine oxoglutarateaminotransferase AS07 242 WB H+ATPase | Plasma membrane H+ATPase AS07 260 IF,IL,WB HSP70 | Heat shock protein 70 AS08 371 IP, WB NifH | Nitrogenase iron protein AS01 021A IF,IHC,WB PEPC | Phosphoenolpyruvatecarboxylase AS09 458 IL,WB PetC | Rieske iron-sulfur protein of Cyt b6/fcomplex AS08 330 BN-PAGE,WB PsaB | PSI-B core subunit ofphotosystem I AS10 695 BN-PAGE,WB PsbA | D1 protein of PSII,C-terminal(thylakoid membrane marker) AS05 084 IF,IG,WB RbcL | Rubisco large subunit AS03 037 IF,IG, TP, WB PsaC | PSI-C core subunit ofphotosystem I AS10 939 WB SPS | Sucrose phosphate synthase,global AS03 035A WB 如需了解更多Agrisera通用抗體請點(diǎn)擊這里。 部分應用案例展示 RbcL | Rubisco large subunit, form I (rabbit),AS03 037 GlnA | Glutamine synthetase,AS01 018 HSP70 | Heat shock protein 70 (cytoplasmic),AS08 371 西美杰代理的瑞典Agrisera公司自1980年成立以來(lái),一直專(zhuān)注于開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的植物單克隆和多克隆抗體,并以其卓越的研發(fā)實(shí)力和生產(chǎn)技術(shù),在全球植物抗體領(lǐng)域占據著(zhù)領(lǐng)導地位。其產(chǎn)品線(xiàn)覆蓋了廣泛的物種范圍,在A(yíng)grisera的產(chǎn)品目錄中包含了眾多模式植物和重要農作物,如擬南芥、水稻、小麥、玉米和番茄等超過(guò)三十種植物,滿(mǎn)足各類(lèi)植物學(xué)研究需求的廣泛抗體庫。有眾多已發(fā)表文獻支持,確保研究結果的準確性和可靠性。北京西美杰科技有限公司是Agrisera品牌中國區代理,致力于為國內廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的免疫學(xué)產(chǎn)品和服務(wù)。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電西美杰全國客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄官方網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多信息。參考文獻: Analyzing photosynthetic complexes in uncharacterized species or mixed microalgal communities using global antibodies. Physiologia Plantarum, 2003: 119:322-327. 更多>

Pfanstiehl 喜獲第15個(gè)CDE登記號- 氨丁三醇Tris Base

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl 2023年推出的新品氨丁三醇Tris Base喜獲CDE登記號F20240000172. 這是Pfanstiehl產(chǎn)品獲得的第15個(gè)CDE登記號!”Tris Base是一種應用非常廣泛的有機試劑。它及其衍生物被廣泛應用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗中的緩沖液的制備,可用于藥物生產(chǎn)、有機合成、生物緩沖劑等。Moderna新冠疫苗處方的披露顯示出Tris可作為極佳的mRNA-LNP復合體緩沖液,引起大家對Tris作為蛋白或核酸類(lèi)藥物緩沖體系的關(guān)注和興趣。Pfanstiehl秉承一貫高品質(zhì)理念,于2023年11月重磅推出的注射級別Tris Base T-153, 具有高純度,超低內毒素,超低金屬雜質(zhì)殘留的特點(diǎn),并且新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶和脂肪酶等多項質(zhì)量指標的檢測,符合多國藥典規定(USP, EP, BP, ChP),可用于生物治療性藥物和疫苗的生產(chǎn)。產(chǎn)品信息: · 產(chǎn)品名稱(chēng): Tris Base, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals· 中文名稱(chēng):三羥甲基氨基甲烷· 分子式:C4H11NO3· 分子量:121.14g/mol· CAS號:77-86-1· 產(chǎn)品貨號:T-153產(chǎn)品特點(diǎn):· 高純度,超低內毒素,超低微生物含量,超低金屬雜質(zhì)殘留· 質(zhì)量指標新增DNA,RNA,DNA酶,RNA酶,脂肪酶的檢測· 符合多國藥典:USP, EP, BP, ChP· 符合ICH Q3D標準DNA· 符合GMP標準· CDE登記號:F20240000172產(chǎn)品應用:· 緩沖液Pfanstiehl Inc.全產(chǎn)品系列如下,歡迎聯(lián)系Pfanstiehl中國區代理北京西美杰科技有限公司獲取100g裝免費樣品。北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國代理,為客戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話(huà)400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多信息。 更多>

蛋白結晶研究入門(mén)全攻略:輕松開(kāi)啟生命科學(xué)探索之旅

蛋白質(zhì)結晶是研究蛋白質(zhì)結構和功能的關(guān)鍵手段,對理解生物大分子作用、疾病機制及藥物開(kāi)發(fā)至關(guān)重要。它涉及蛋白質(zhì)分子在溶液中規則堆積形成有序晶體的過(guò)程,受蛋白質(zhì)純度、濃度、緩沖液成分等多種因素影響。為獲高質(zhì)量晶體,需進(jìn)行樣品制備、條件篩選與優(yōu)化等。蛋白結晶研究推動(dòng)生物學(xué)和醫學(xué)領(lǐng)域發(fā)展,支持藥物設計和蛋白質(zhì)工程。本文概述了蛋白質(zhì)結晶的制備、方法、篩選、優(yōu)化等要點(diǎn),為相關(guān)研究提供參考。 一 蛋白質(zhì)晶體的發(fā)展史 蛋白質(zhì)晶體的研究始于19世紀中期,Hunefeld首先報道了血紅蛋白晶體。到了20世紀,結晶技術(shù)成為提純和研究蛋白質(zhì)的重要方法,特別是John Jacob Abel對胰島素的結晶,以及James B. Sumner對酶作為晶體蛋白質(zhì)的確認。1930年代末,蛋白質(zhì)晶體開(kāi)始用X射線(xiàn)分析,開(kāi)啟了結構生物學(xué)的新篇章。隨著(zhù)遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展,特別是DNA技術(shù)的應用,蛋白質(zhì)晶體的研究在1980年代后得到了極大的加速和變革。 二 蛋白結晶:藝術(shù)與科學(xué)的結合 盡管現代分子生物學(xué)和晶體學(xué)的進(jìn)步為許多實(shí)驗提供了便捷,但蛋白質(zhì)結晶仍然是一個(gè)既簡(jiǎn)單又復雜的挑戰。這一過(guò)程結合了科學(xué)的方法與藝術(shù)般的直覺(jué)和創(chuàng )造力,然而又高度依賴(lài)經(jīng)驗的積累。 由于生物大分子(如蛋白質(zhì))由大量不同原子以復雜方式組合,結晶過(guò)程中存在諸多變量和影響因素。這些因素包括蛋白質(zhì)純度、濃度、pH值、離子強度等,每一個(gè)變量都可能對結晶結果產(chǎn)生顯著(zhù)影響(表1和2)。 表1. 影響蛋白質(zhì)晶體生長(cháng)的化學(xué)變量 樣品的純度 基因修飾 樣品的構象靈活性 分子的對稱(chēng)性 樣品的均一性 樣品的穩定性和變性程度 PH值和緩沖液 等電點(diǎn) 沉淀劑的類(lèi)型和濃度 存在his標簽和其他純化標簽與否 樣品的濃度 熱穩定性 添加劑、輔助因子、配體、抑制劑、效應劑和輔料 PH穩定性 混沌劑,如尿素、鹽酸胍、硫酸銨等 樣本的獲取、處理、保存等歷史過(guò)程 洗滌劑 蛋白水解 金屬離子 微生物污染 離子強度 樣品保存 還原劑或氧化劑 樣品處理及相關(guān)的清潔度 樣品是來(lái)源 陰、陽(yáng)離子類(lèi)型及濃度 無(wú)定形顆粒物質(zhì) 相對過(guò)飽和度 翻譯后修飾 其他試劑的初始濃度和最終濃度 化學(xué)修飾 平衡的路徑和速率 表2.可能或確實(shí)影響蛋白質(zhì)晶體生長(cháng)的物理變量 溫度 電磁場(chǎng) 平衡速率 結晶裝置的表面 結晶方法 試劑的粘度 重力、對流和沉降 異質(zhì)和外延成核劑 振動(dòng)和聲音 結晶裝置的幾何形狀 樣品和試劑的體積 時(shí)間 壓力 試劑的介電性能 結晶實(shí)驗通常從篩選開(kāi)始,旨在找到能產(chǎn)生晶體的關(guān)鍵變量組合。然而,為了獲得具有特定特性的晶體(如用于結構生物學(xué)、純化或生物治療研究),往往需要進(jìn)一步的優(yōu)化實(shí)驗(表3和表4)。 表3.結晶方法-過(guò)飽和度的實(shí)現 氣相擴散法(Sitting, Hanging, Sandwich) 序列提?。〝祿幚砗头治黾夹g(shù)) 分批結晶法(微分批結晶) pH誘導(簡(jiǎn)單、可控) 透析技術(shù) (微透析技術(shù)發(fā)揮輔助作用) 溫度誘導(操作簡(jiǎn)便、成本較低,需與其他方法結合使用) 自由界面擴散(逆擴散, 液橋) 效應物添加(也加Silver Bullet) 控制蒸發(fā) 表4.蛋白質(zhì)結晶所用試劑 鹽類(lèi) (硫酸銨、甲酸鈉、磷酸銨等) 非揮發(fā)性有機物((±)-2-甲基-2,4-戊二醇、1,6-己二醇、甘油等) 聚合物 (聚乙二醇、分子量范圍在200到20,000之間、乙烯亞胺、杰凡尼&reg;等) 緩沖液 (HEPES、Tris、醋酸鈉、MES等) 揮發(fā)性有機物 (2-丙醇、1,4-二氧六環(huán)、乙醇等) 添加劑 (氯化鈣、氯化鈉、三(2-羧乙基)膦、n-辛基-β-D-葡糖苷等) 盡管現代技術(shù)提供了豐富的資源和工具,但結晶并非僅僅是使用這些工具那么簡(jiǎn)單。成功的結晶策略需要基于一些基本原則,正如Alex McPherson等結晶領(lǐng)域的先驅所提出的,在進(jìn)行實(shí)驗之前,考慮這些原則將為您的結晶工作提供堅實(shí)的基礎。 三 蛋白結晶的關(guān)鍵要素 樣本:樣本的純度是結晶成功的基石,需細致處理以保證樣本高均一性。 均一性:蛋白質(zhì)樣品的化學(xué)結構和分子量的一致性對形成有序晶體至關(guān)重要。 溶解度:優(yōu)化樣本在緩沖液中的溶解條件,追求單分散性,避免聚集和沉淀。 穩定性:確保蛋白質(zhì)在結晶過(guò)程中保持結構和功能穩定,避免變性。 超飽和:通過(guò)控制超飽和度,誘導蛋白質(zhì)分子有序排列形成晶核。 締合:調控蛋白質(zhì)分子間的有序相互作用,促進(jìn)有序聚集,避免非特異性聚集。 成核:控制溶液中蛋白質(zhì)初始結晶核的形成,以?xún)?yōu)化晶體數量、大小和質(zhì)量。 多樣性:嘗試多種方法和條件來(lái)發(fā)現適合特定蛋白質(zhì)的結晶條件。 控制:精確調控實(shí)驗條件和過(guò)程,確保實(shí)驗結果的準確性和可重復性。 雜質(zhì):保持樣品純度,減少雜質(zhì)對結晶和后續研究的干擾。 保存:妥善保護結晶出的蛋白質(zhì)晶體,防止其受到損害,確保后續研究的可靠性。 西美杰代理的美國Hampton Research公司是一家專(zhuān)注于蛋白質(zhì)晶體研究的領(lǐng)先生產(chǎn)商,其廣泛的產(chǎn)品組合涵蓋了從結晶初步篩選到結晶優(yōu)化篩選,再到定制單組分結晶試劑和結晶生長(cháng)優(yōu)化試劑等全方位產(chǎn)品。這些產(chǎn)品能夠滿(mǎn)足不同蛋白結晶研究的需求,包括普通蛋白、膜蛋白以及蛋白復合體的結晶。 西美杰代理的Hampton Research以其尖端的生物大分子結晶技術(shù)和實(shí)用豐富的產(chǎn)品線(xiàn),為全球晶體研究人員提供了全面的晶體研究試劑和實(shí)驗耗材。這些產(chǎn)品不僅極大地提升了科研人員的工作效率,而且幫助他們取得了卓越的科研成果,Hampton Research已成為晶體研究領(lǐng)域備受信賴(lài)的品牌之一。西美杰Hampton Research蛋白結晶熱銷(xiāo)產(chǎn)品 Hampton Research蛋白結晶篩選試劑盒 品牌 貨號 品名 規格 簡(jiǎn)介 Hampton HR2-144 Index 10ml, tube format 蛋白質(zhì)、絡(luò )合物、多肽、核酸和水溶性小分子等多種試劑體系的經(jīng)典結晶條件初篩選試劑盒,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-110 Crystal Screen 10 ml, tube format 蛋白、可溶性多肽、核酸和水溶性小分子等多種試劑體系結晶條件初篩試劑盒,包含50個(gè)條件 Hampton HR2-112 CrystalScreen 2 10ml, tube format 蛋白、可溶性多肽、核酸和水溶性小分子等多種試劑體系結晶條件初篩試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-114 MembFac 10 ml, tube format 適用于膜蛋白的結晶條件初篩試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-116 Natrix 10ml, tube format 核酸、核酸/蛋白質(zhì)復合物結晶條件初篩試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-117 Natrix 2 10 ml, tube format 核酸、核酸/蛋白質(zhì)復合物結晶條件初篩試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-082 PEGRx1 10ml, tube format 聚合物和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-084 PEGRx 2 10 ml, tube format 聚合物和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-126 PEG/IonScreen 10ml, tube format 聚合物、鹽和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-098 PEG/Ion 2 Screen 10 ml, tube format 聚合物、鹽和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-107 SaltRx1 10ml, tube format 鹽和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-109 SaltRx 2 10 ml, tube format 鹽和pH條件初篩與二次篩選試劑盒,包含48個(gè)條件 除上述產(chǎn)品外,西美杰還提供包括GRAS Screen?、Grid Screen系列、Low Ionic Strength Screen、XP Screen、JBScreen Wizard等等在內的多種結晶條件篩選試劑盒,歡迎致電西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006咨詢(xún)訂購。Hampton Research蛋白結晶優(yōu)化試劑盒 品牌 貨號 品名 規格 簡(jiǎn)介 Hampton HR2-072 Solubility& Stability Screen 0.5ml, Deep Well block format 溶解度和穩定性篩選,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-413 Solubility & StabilityScreen 2 0.5 ml, Deep Well blockformat 溶解度和穩定性篩選,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-070 SlicepH 0.5ml, Deep Well block format pH篩選試劑盒,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-138 Additive Screen 1 ml, Deep Well blockformat 添加劑篩選試劑盒,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-459 GRASAdditive 1ml, Deep Well block format GRAS添加劑篩選,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-096 Silver Bullets 0.50 ml, Deep Well blockformat 添加劑篩選試劑盒,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-407 DetergentScreen 0.25ml, Deep Well block format 洗滌劑篩選試劑盒,包含96個(gè)條件 Hampton HR2-214 Ionic Liquid Screen 0.5 ml, tube format 離子液體篩選試劑盒,包含24個(gè)條件 Hampton HR2-241 StockOptionspH 10ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含45個(gè)條件 Hampton HR2-235 StockOptions Sodium Citrate 10 ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含24個(gè)條件 Hampton HR2-239 StockOptionsSodium Cacodylate 10ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含24個(gè)條件 Hampton HR2-243 StockOptions MES 10 ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含20個(gè)條件 Hampton HR2-103 StockOptionsBis-Tris Propane 10ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含33個(gè)條件 Hampton HR2-102 StockOptions HEPES 10 ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含15個(gè)條件 Hampton HR2-227 StockOptionsPolymer 10ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含23個(gè)條件 Hampton HR2-245 StockOptions Salt 10 ml, tube format 晶體生長(cháng)篩選試劑盒,包含49個(gè)條件 Hampton HR2-073 CryoPro 1ml, tube format 晶體冷凍保護劑篩選,包含48個(gè)條件 Hampton HR2-501 50% v/v Jeffamine&reg; M-600&reg; pH 7.0 200 ml 結晶級Jeffamine M-600用于結晶條件優(yōu)化 Hampton HR2-525 50%w/v Polyethylene glycol 1,500 200mL 結晶級PEG 1500用于結晶條件優(yōu)化 Hampton HR2-527 50% w/v Polyethylene glycol3,350 Monodisperse 200 mL 結晶級PEG 3350用于結晶條件優(yōu)化 Hampton HR2-529 50%w/v Polyethylene glycol 4,000 200mL 結晶級PEG 4000用于結晶條件優(yōu)化 以上試劑盒中的單組分條件可單獨訂購。除上述試劑盒外,西美杰還提供包括Proti-Ace?、Silica Hydrogel Kit、Heavy Atom Screens、I3C Phasing Kit等多款結晶優(yōu)化篩選試劑盒及試劑,歡迎致電西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006咨詢(xún)訂購。Hampton Research蛋白結晶耗材工具 品牌 貨號 品名 規格 簡(jiǎn)介 Hampton HR2-320 SeedBead Kit 24tubes with PTFE Seed Bead 晶種制備珠 Hampton HR3-105 MASTERBLOCK&reg; 96 Deep Wellpolypropylene plate 50 plate case 96孔深孔板 Hampton HR3-081 72Well Microbatch Plate, Greiner 654102 untreated,hydrophobic - 270 plate case 72孔油下結晶板 Hampton HR3-125 Swissci 3 Well MidiCrystallization Plate in UVP (40) 40 plate case 3微孔/96孔坐滴板 Hampton HR3-158 CryschemPlate 24plate case 24孔坐滴板 Hampton HR3-231 22 mm x 0.22 mm Siliconizedcircle cover slides 1.0 ounce pack (~120slides) 圓形硅化玻璃蓋玻片 Hampton HR3-233 22mm x 0.22 mm Siliconized circle cover slides 10.0ounce case (~1,200 slides) 圓形硅化玻璃蓋玻片 Hampton HR3-609 Crystal Clear Sealing Film 100 pack 結晶板封口膜 Hampton HR4-216 CrystalCrusher 5pack 晶體粉碎器 Hampton HR4-217 Crystal Probe 12 pack 一次性不銹鋼晶體針 Hampton HR4-733 CrystalCap withVial - 60 pack 晶體環(huán)底座 Hampton HR4-811 Micro-Tools Set each 晶體處理工具套裝,含8個(gè)不同形狀的晶體探針 除上述產(chǎn)品外,西美杰還提供各種規格結晶板、loop、微橋、密封膠,Pucks等工具耗材及整套工具箱,幫助研究人員更快更高效的開(kāi)展實(shí)驗。歡迎致電西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006咨詢(xún)訂購。 西美杰作為Hampton Research在中國的官方授權代理,致力于為用戶(hù)提供卓越的技術(shù)支持和周到的售后服務(wù)。西美杰始終秉持“We promise what we can do. We do what we have promised”的核心理念,為用戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。若您想了解更多產(chǎn)品信息,歡迎致電北京西美杰全國客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄官網(wǎng)www.mm2332.com進(jìn)行查詢(xún)和了解。 References and Readings 1.Der Chemismus in der tierescher Organization, Hunefeld, F 1. (1840)p.160.Leipzig University, Germany. 2.A brief h istory of protein crystal growth, MePherson, A. (1991). J. Cryst.Growth, 110,1-10. 3 über die Eiweisskorper verschiedenen Oelsamen, Ritthausen, H. (1880)Pfluegers Arch. 21,81-104. 4 The proteins of the Brazil nut, Osborne T.(1891). Am. Chem. J. 13,212-218. 5 Crystalline insulin., Abel, 」.J., Geiling, E. M. K., Roultier, O. A., Bell, F. M.&Wintersteiner, 0.(1927).]. Pharmacol. Exp. Ther. 31,65-85. 6 The Enzymes, Sumner, J.B.& Somers, G.F(1943). New York: Aca-demic Press. 7 Crystalline enzymes, Northrop, M., Kunitz, M. & Herriott, R. M. (1948)New York: Columbia University Press. 8 Present at the flood: How structural molecular biology came about,Dickerson,R.E.(2005).FASEB J.20,809-810. 9 Preparation and Analysis of Protein Crystals, McPherson, A.(1982)New York: lohn Wiley & Sons. 10.Current approaches to macromolecular crystallization. McPherson, A. (1990).Eur.Biochem.189,1-23. 11.Crystallization of Biological Macromolecules, McPherson, A.(1999)Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 12Introduction to protein crystallization, McPherson, A. and Gavira, J.A.(2014) Acta Crystallographica F, Volume 70, Part 1, 2-20. 13.Some Words of Advice from an Old Hand, Alexander McPherson, pages1-9, in Protein Crystallization, Second Edition, Edited by Terese Berg-fors. International University Line, 2009. 更多>

Cygnus新品上市 | BL21(DE3)宿主細胞蛋白檢測試劑盒

在BL21(DE3)大腸桿菌中進(jìn)行重組表達,是常用的生產(chǎn)治療性蛋白的有效且經(jīng)濟的手段。然而,制造和純化過(guò)程中可能會(huì )受到BL21(DE3)大腸桿菌菌株中宿主細胞蛋白(HCPs)的污染,這一情況需嚴格控制。降低HCP雜質(zhì)至最低水平,滿(mǎn)足法規要求,是一項重要的監管任務(wù)。 Cygnus最新推出的BL21(DE3) HCP Elisa檢測試劑盒(貨號F1060),正是為此目的而設計,適用于純化工藝開(kāi)發(fā)與優(yōu)化、過(guò)程控制、常規質(zhì)量控制和產(chǎn)品放行等檢測。? 特點(diǎn)與優(yōu)勢: 基于廣泛反應的抗BL21(DE3) HCP抗體,通過(guò)抗體親和純化和質(zhì)譜測定(AAE-Mass),可檢測超過(guò)90%的HCP。 具有高特異性和高靈敏度(LOD約0.4 ng/ml,LLOQ約3 ng/ml),且重復性良好。 一步法檢測,可在3小時(shí)內得到實(shí)驗結果。 產(chǎn)品信息 產(chǎn)品名稱(chēng) 中文名稱(chēng) 貨號 規格 LOD LLOQ BL21(DE3) HCP ELISA Kit BL21(DE3)宿主細胞蛋白檢測試劑盒 F1060 1 kit 0.4 ng/mL 3 ng/mL Cygnus BL21(DE3)宿主細胞蛋白檢測試劑盒,一款強大而可靠的工具,能幫助您應對多樣化的HCP雜質(zhì)控制需求,確保生產(chǎn)過(guò)程的合規性,如需了解更多信息,歡迎聯(lián)系銷(xiāo)售人員或致電西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006。 Cygnus宿主細胞蛋白(HCP)檢測系列 Cygnus Technologies, LLC.為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法,旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測超過(guò)50種不同表達系統的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專(zhuān)注于生物技術(shù)應用免疫檢測的高靈敏度分析技術(shù)的專(zhuān)家,Cygnus的產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過(guò)25年。 北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理,與國內眾多知名藥企,CRO/CMO企業(yè)建立了長(cháng)久穩定的合作關(guān)系。多年來(lái)西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段,提高藥物質(zhì)量、純度和安全,加速優(yōu)化研發(fā)工藝,減少產(chǎn)品上市時(shí)間,降低QC成本。 更多>

Pfanstiehl 麥芽糖一水合物喜獲第14個(gè)CDE登記號

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl 麥芽糖一水合物喜獲CDE登記號F20240000124. 這是Pfanstiehl產(chǎn)品獲得的第14個(gè)CDE登記號!” 麥芽糖(Maltose)是一種二糖,由兩個(gè)葡萄糖分子以α-1,4糖苷鍵連接而成。10%麥芽糖的溶液為等滲液,靜脈注射給藥時(shí),被α-葡苷酶分解為兩分子的葡萄糖,代謝后為肌體提供能量,對血糖水平影響很低。因此,在以蛋白質(zhì)為主要成分的靜脈注射制劑中,麥芽糖通常作為穩定劑發(fā)揮作用。由于麥芽糖可不依賴(lài)胰島素而進(jìn)入細胞,它的代謝不會(huì )影響到血液中葡萄糖的濃度,因此在糖耐量降低的患者中仍可安全使用。 麥芽糖分子式(圖片來(lái)源www.yunkp.com) Pfanstiehl秉承一貫高品質(zhì)理念,重磅推出的GMP級別麥芽糖一水合物, 具有超高純度,超低內毒素,超低β-葡聚糖,超低微生物含量, 超低金屬雜質(zhì)殘留(ppb級別)的特點(diǎn),符合多國藥典規定(USP, EP, BP, ChP),可用于生物治療性藥物和疫苗的生產(chǎn)。 產(chǎn)品信息: · 產(chǎn)品名稱(chēng): Maltose Monohydrate. High Purity, Low Endotoxin, Low Metals · 中文名稱(chēng):麥芽糖一水合物 · 分子式:C12H24O12 · 分子量:360.31g/mol · 產(chǎn)品貨號:M-167 · DMF:028980 · CDE:F20240000124 產(chǎn)品特點(diǎn): · 高純度,低內毒素,低微生物含量,低β-glucan,低金屬雜質(zhì)殘留 · 符合多國藥典:USP, EP, BP, JP, ChP · 符合ICH Q3D標準 · 符合GMP標準 · 植物源 產(chǎn)品應用: · 蛋白質(zhì)穩定 · 血液分離 · 防止IVIG溶液中的蛋白質(zhì)聚集 如果您對Pfanstiehl的麥芽糖一水合物M-167感興趣,可聯(lián)系Pfanstiehl中國區代理西美杰科技獲取詳細的產(chǎn)品概況說(shuō)明文件如下。也歡迎聯(lián)系獲取測試樣品。 Pfanstiehl Inc.產(chǎn)品系列如下,歡迎聯(lián)系Pfanstiehl中國區代理北京西美杰科技有限公司獲取100g裝免費樣品。 北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國代理,為客戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話(huà)400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多信息。 更多>

Mirus Label IT?——高效、一步法用于體內和體外核酸標記的新技術(shù)

細胞轉染在科學(xué)研究中扮演著(zhù)十分重要的角色,但也是最容易被忽略的一環(huán)。轉染效率的高低不僅影響實(shí)驗結果,甚至可能導致得到的實(shí)驗結果是無(wú)效的。在多種類(lèi)型核酸的細胞轉染實(shí)驗中,研究者們常需要進(jìn)一步優(yōu)化轉染條件以達到最優(yōu)的轉染效率,特別是較難轉染的細胞,而針對特定細胞類(lèi)型選擇對應專(zhuān)業(yè)化的轉染試劑只是邁向轉染實(shí)驗成功的第一步。 成立于1995年的Mirus Bio,專(zhuān)注及深耕核酸遞轉領(lǐng)域多年,從最早具有低毒性的TransIT ® -LT1到GMP級別、可用于A(yíng)AV和LV生產(chǎn)的TransIT-VirusGEN® (產(chǎn)品年鑒請見(jiàn)圖1)。直至文稿發(fā)布時(shí),使用Mirus產(chǎn)品發(fā)表文章已超過(guò)1萬(wàn)篇,并且發(fā)表文章及Mirus數據庫涵蓋了超過(guò)1200種細胞類(lèi)型。 圖1 Mirus產(chǎn)品年鑒 在細胞轉染實(shí)驗中,研究者們常常會(huì )忽略轉染效率/成功率的評估,那么是否有對應技術(shù)或者方法允許實(shí)時(shí)監測DNA/RNA的成功遞送以及細胞內的分布狀態(tài)呢?Mirus Bio Label IT® 核酸標記試劑盒為廣大的科研工作者提供了一個(gè)方向。Label IT® 核酸標記試劑盒可對任何類(lèi)型核酸,進(jìn)行高效、直接的標記,并且為on-step的實(shí)驗操作?;诜敲阜磻臉擞浄椒?,在不損傷核酸完整性、不影響基因表達的前提下,將選擇的標記 (熒光、生物素、地高辛等)以共價(jià)的方式連接到核酸上。 Label IT® 試劑盒有多種標簽可供選擇,包括 Cy®3、Cy®5、CX-羅丹明、TM-羅丹明、熒光素、MFP488、地高辛、生物素和二硝基苯基(DNP)。Label IT® 核酸修飾試劑盒(胺)也可用于基于胺的功能基團進(jìn)行DNA或RNA修飾。產(chǎn)品特點(diǎn)如下: 可用于標記任何DNA或RNA模板——適用于多種應用 (In vitro & in vivo),如Crispr基因編輯、核酸遞轉、RNA干擾/表達實(shí)驗、FISH、Microarray等; 一步法標記——簡(jiǎn)單、輕松即可完成穩定的模版標記反應; 可根據實(shí)驗需求或應用,調節標記的密度——以獲得最佳檢測標記 DNA 或RNA 的靈敏度; 基于共價(jià)化學(xué)反應——對核酸殘基的修飾為永久性、無(wú)損傷的,是多種科研應用的理想選擇。 什么是核酸標記?如何標記核酸?如何檢測? 絕大多數基于分子和生物學(xué)的In vitro 及 in vivo研究都依賴(lài)于核酸的標記或標簽,理想情況下,此類(lèi)標記或標簽不會(huì )影響核酸功能以及研究結果。因此,也發(fā)展出來(lái)多種核酸標記方式,大致可以歸為以下兩類(lèi): -      化學(xué)標記法:基于結合核酸的反應基團,比如Mirus Label IT® 核酸標記試劑盒屬于此類(lèi),并且整個(gè)反應過(guò)程并不需要酶的參與。 Label IT® 化學(xué)標記試劑由三個(gè)部分組成(如圖2): (1)      標簽/標記 (綠色區域); (2)      Linker,與核酸進(jìn)行靜電相互作用 (黃色區域); (3)      Label IT® 試劑以共價(jià)形式連接到核酸中活性雜原子的烷基化基團(藍色區域)。 圖2. Label IT®標記分子示意圖 -      基于酶反應標記法:通過(guò)酶促反應,在該反應過(guò)程中加入標記修飾的核酸。 當待研究的核酸加入標記后,可通過(guò)以下兩種方式進(jìn)行檢測: -      直接檢測:這時(shí),標記的核酸中包含了可用于光學(xué)、發(fā)光或產(chǎn)生熒光信號的報告分子。 -      間接檢測:標記的核酸帶有標簽或標記,該標記需要特異性的結合報告偶聯(lián)分子,如生物素結合帶有熒光標記的鏈霉親和素,地高辛結合帶有熒光標記的特異性抗體等。 Label IT® 核酸標記試劑盒——不改變核酸結構功能 基因沉默相關(guān)功能研究在分子和細胞生物學(xué)中發(fā)揮著(zhù)重要作用,化學(xué)轉染也在該研究領(lǐng)域扮演者重要角色。小干擾 RNA (Small interfering RNAs, siRNA),常作為研究各種類(lèi)型細胞中蛋白功能核酸類(lèi)型,通過(guò)有效的knockdown從而影響基因表達。那么,加入Label IT®標記的核酸,是否會(huì )改變核酸結構,從而影響到后續實(shí)驗結果呢? 評估測試使用Label IT® siRNA Tracker? 試劑盒,將相同siRNA加入不同標記 (CyTM3, CyTM5, 熒光素, CX-羅丹明 )以及沒(méi)有標記siRNA,轉染后,可通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察到帶有標記的siRNA?;虮磉_結果顯示,帶有不同標記的siRNA,其目的基因表達水平近似,意味著(zhù)加入Label IT®標記的核酸,并不影響目的基因表達及功能 (圖3)。 圖3  Label IT® siRNA Tracker? 試劑盒評估測試 Label IT® 核酸標記試劑盒——前沿應用舉例 應用一:使用Label IT®技術(shù),富集CRISPR'd細胞 Nasri 和 Mir 等人在文章中闡述了如何通過(guò) Label IT® 技術(shù),富集 CRISPR/Cas編輯成功的細胞?;蚪M編輯實(shí)驗面臨最大的挑戰之一是如何從未編輯的細胞中成功的篩選/富集出成功編輯的細胞,特別當未被編輯的細胞相對于成功編輯的細胞,具有生長(cháng)/增殖優(yōu)勢,使得細胞篩選變得更加困難。 為了高效的區分經(jīng)過(guò)基因編輯及未編輯的細胞,作者在CRISPR引導RNA ( gRNA) 與 Cas9 形成復合物及轉染細胞前,使用Label IT®對gRNA進(jìn)行了熒光標記,實(shí)驗流程示意圖如下: 研究結果表明,使用Label IT®標記的gRNA 不會(huì )影響基因編輯效率,并且可通過(guò)熒光分選/富集成功編輯的細胞群。進(jìn)一步地,研究者們將該 CRISPR 實(shí)驗流程應用于針對多種細胞類(lèi)型的GADD45B基因編輯實(shí)驗。根據細胞類(lèi)型的不同,經(jīng)過(guò)Label IT®標記的細胞亞群中,其成功編輯細胞占比相對于總細胞群體提了15-40%。 發(fā)表文章信息: 標題: Fluorescent labeling of CRISPR/Cas9 RNP for gene knockout in HSPCs and iPSCs reveals an essential role for GADD45b in stress response 作者: Masoud Nasri, Perihan Mir et al. 雜志: Blood Adv, Volume 3(1), Jan 2019. DOI: 10.1182/bloodadvances.2017015511 應用二:使用Label IT®技術(shù),聚焦于免疫系統研究 Label IT® 核酸標記技術(shù)可用于一種新型疫苗注射方法-微針陣列(microneedle array, MNA)的表征研究。傳統的疫苗注射方法是通過(guò) 3 厘米以上長(cháng)度的針頭進(jìn)行皮下注射,而微針陣列則是由微米級針頭所組成(示意圖如下),以無(wú)痛的方式細微的的穿透皮膚,進(jìn)入到富含免疫細胞群,可減少患者的不適感。 為了提高疫苗的效力(efficacy),通常會(huì )將免疫刺激分子或 "激動(dòng)劑(agonists) "與疫苗的靶標或抗原一同加入疫苗制劑中。Edwards 等人的研究表明,雙鏈 polyIC RNA 和單鏈 CpG DNA 寡核苷酸可作為微陣列中的激動(dòng)劑(agonists)。并且,研究者們認為帶負電荷的核酸激動(dòng)劑(agonists)和帶正電荷的抗原之間的靜電相互作用,幫助了微陣列的組裝。通過(guò)使用 Label IT® Cy®3 和 Cy®5 ,分別針對以上兩種核酸類(lèi)型進(jìn)行熒光標記,方便用于查看標記核酸在微針上的分布,這樣就允許了研究者們按照所需要的特定比例,將兩種激動(dòng)劑均一的加入到微陣中,從而使得精確的調整微針陣列 MNA 疫苗的免疫反應成為可能。 發(fā)表文章信息: 標題: Tuning innate immune function using microneedles containing multiple classes of toll-like receptor agonists 作者: Camilla Edwards, Robert Oakes et al. 雜志: Nanoscale, Volume 15, Apr 2023. DOI: 10.1039/D3NR00333G Label IT® 核酸標記試劑盒-產(chǎn)品選擇 Label IT®試劑盒共有以下四種形式可供選擇,以應對研究人員核酸標記實(shí)驗的不同應用場(chǎng)景需求: Label IT® Nucleic Acid Labeling Kits Label IT®Tracker? Intracellular Nucleic Acid Localization Kits Label IT® siRNA Tracker? Intracellular Localization Kits Label IT® Nucleic Acid Modifying Kits 下表總結了不同種類(lèi)Label IT®試劑盒區別: Label IT® Nucleic Acid Labeling Label IT® Tracker? Label IT® siRNA Tracker? Label IT® Nucleic Acid Labeling Modifying 應用 in vitro & in vivo應用的多種類(lèi)型核酸標記 in vitro & in vivo質(zhì)粒追蹤實(shí)驗 in vitro & in vivo siRNA追蹤實(shí)驗 DNA氨基修飾 試劑盒組分 Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Reagent D1& Buffer N1 G50 Microspin Columns Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer siRNA Dilution Buffer Label IT® Reagent Reconstitution Solution 10X Labeling Buffer Reagent D1& Buffer N1 G50 Microspin Columns Label IT® : 核酸比例 1 µl  : 1 µg 0.5 µl  : 1 µg 1 µl  : 1 µg 0.5 µl  : 1 µg 標記密度 每20-60 bp 1個(gè)標記 每60-140 bp 1個(gè)標記 每15-40 bp 1個(gè)標記 每20-60 bp 1個(gè)標記 標記物類(lèi)型 Cy®3 Cy®5 熒光素 CX-羅丹明 TM-羅丹明 生物素 MFP488 地高辛 DNP Cy®3 Cy®5 熒光素 CX-羅丹明 TM-羅丹明 生物素 Cy®3 Cy®5 熒光素 CX-羅丹明 TM-羅丹明 生物素 氨基 試劑盒規格 25 µl 100 µl 50 µl 50 µl 25 µl 100 µl 更多有關(guān)產(chǎn)品常疑問(wèn)FAQ,請查看官網(wǎng)鏈接 Label IT® 核酸標記試劑盒-實(shí)驗優(yōu)化之核酸標記密度 理想的密度取決于被標記的核酸類(lèi)型及下游應用。在需要直接追蹤核酸的實(shí)驗中,更適合較高的核酸標記密度;而在想要維持/完整的還原標記核酸的生物學(xué)功能的實(shí)驗中,則更加適合較低的標記密度。使用 Label IT® 核酸標記技術(shù),可以輕松調整到理想的標記密度。 Label IT® 試劑與核酸的比例(v:w)的改變與標記密度呈線(xiàn)性相關(guān)性(圖 4)。例如,按照說(shuō)明的初次實(shí)驗建議,需加入 5 µl Label IT® 試劑標記 5 µg DNA,此時(shí)v:w比例為1:1。在保證孵育時(shí)間和 DNA 量不變的條件下,如將 Label IT® 試劑的量降低為 2.5 µl 或 增加到10 µl,標記密度將分別降低一半或增加一倍。 實(shí)驗Tips:使用過(guò)高的 Label IT® 試劑量(超過(guò)建議量的 4 倍),可能會(huì )導致核酸裂解或引起 Label IT® 熒光基團淬滅。 核酸標記密度與所使用的 Label IT® 試劑量及反應的孵育時(shí)間呈正線(xiàn)性相關(guān)??赏ㄟ^(guò)調整反應中 Label IT® 試劑的用量或反應的孵育時(shí)間 (孵育溫度仍為37℃),可輕松靈活的調整到所需要的理想標記密度。 圖4. 核酸標記密度與Label IT®試劑用量和反應孵育時(shí)間成正比 實(shí)驗Tips:如何計算核酸標記密度,詳細實(shí)驗步驟及方法請見(jiàn)“Calculate Nucleic Acid Labeling Density”。 Mirus Bio公司介紹 Mirus成立于1995年,始終秉承著(zhù)為基因遞轉提供最佳方法及最高效的工具。憑借超過(guò) 25 年轉染領(lǐng)域的深根細作,獲得了多項技術(shù)突破,已成為核酸遞送領(lǐng)域的全球領(lǐng)導者和值得信賴(lài)的品牌。Mirus科學(xué)家團隊不斷突破轉染技術(shù)的極限,推出了VirusGEN®轉染試劑與RevIT?增強劑,進(jìn)一步提升AAV/Lv產(chǎn)量,助力推動(dòng)生物治療藥物的降本增效,為CGT領(lǐng)域客戶(hù)賦能。 北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區總代理,始終秉承著(zhù)專(zhuān)業(yè)、嚴謹的態(tài)度為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),Mirus熱銷(xiāo)轉染產(chǎn)品常備現貨。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電北京西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多產(chǎn)品信息。 更多>

Nereus LentiHERO? | 一種提高慢病毒回收率與純化效率的新技術(shù)

病毒載體技術(shù)的研究不斷深入和發(fā)展,為遺傳物質(zhì)遞送提供了理想的工具,成為目前細胞治療與基因治療的主要遞送技術(shù)。然而,研究人員在細胞基因治療產(chǎn)品的純化工藝方面卻面臨著(zhù)重大挑戰。目前的純化工藝大都來(lái)源于為單克隆抗體開(kāi)發(fā)的解決方案,不適合用于病毒載體的純化。而基于傳統樹(shù)脂色譜法有明顯的局限性,如回收率低、耗時(shí)且成本高。 AstreAdept? 是一種新型的納米纖維材料,可有效解決粒徑大且脆弱的病毒顆粒純化面臨的耗時(shí)長(cháng)、回收率低且雜質(zhì)含量高等問(wèn)題。在這里,我們展示了該技術(shù)整合到離心管形式的Nereus LentiHERO?,并將其優(yōu)勢帶到實(shí)驗室規模的病毒載體純化中。 高瞬時(shí)結合表面積,更高效地處理慢病毒載體 AstreAdept?采用兩種不同的電紡材料(纖維素:575nm(+/- 50 nm)和非纖維素:200nm(+/- 50 nm))交織形成特性?xún)?yōu)越的復合膜結構,可使產(chǎn)物溶液在高流速條件下快速擴散到高結合表面積(圖1),實(shí)現無(wú)阻礙的進(jìn)入孔道。將該技術(shù)整合到層析純化基質(zhì)的LentiHEROTM將慢病毒純化帶入一個(gè)新的紀元。 圖1. AstreAdept? 新型的復合納米纖維材料解決脆弱大分子純化的瓶頸問(wèn)題。 無(wú)阻礙液體流動(dòng)系統優(yōu)點(diǎn): 結合表面積更大 高回收率 高流速 Nereus LentiHERO? 用于慢病毒純化 圖2. Nereus LentiHERO? 僅需5步離心即可實(shí)現慢病毒快速純化 Nereus LentiHERO?顯著(zhù)提高慢病毒回收率 高動(dòng)態(tài)結合載量與高回收率,提升實(shí)驗室規模慢病毒生產(chǎn)效率。 圖3. 15%穿透時(shí),每根離心柱的動(dòng)態(tài)結合載量1.9E+10。 Nereus LentiHERO?離心柱以20 mv/min的速度上樣,流穿收集在10mL液體中,使用p24 ELISA分析,基于上樣的總VP,計算VP穿透百分比。 圖4. 有無(wú)血清培養體系慢病毒回收率:純化后樣品中慢病毒/病毒原液%。 血清(-) n=3,血清(+)n=2 ? 高流速條件下不影響動(dòng)態(tài)結合載量 ? 保留時(shí)間 < 1s ? 無(wú)血清培養體系LV回收率>60% Nereus LentiHEROTM宿主細胞蛋白殘留降低95%以上 降低HCP殘留在實(shí)驗室規模的樣品生產(chǎn)同樣重要,可顯著(zhù)減少非必要的免疫反應。 用Nereus LentiHERO?純化的樣品 ? 95% 宿主蛋白的去除 ? 通過(guò)SDS-PAGE,洗脫液中檢測不到宿主蛋白 ? 不論培養體系中有無(wú)血清,都能顯著(zhù)去除宿主蛋白圖5. Nereus LentiHEROTM可去除95% 以上宿主蛋白 Nereus LentiHEROTM對病毒結構和感染效力影響很小 Nereus LentiHERO? 純化后的慢病毒顆粒保持了原有的功能、形態(tài)和大小 ? 重要結構蛋白完整,如編碼了衣殼、基質(zhì)與核衣殼的Gag蛋白 ? 慢病毒顆粒大小和形態(tài)無(wú)改變 ? 純化后的慢病毒感染活力未降低 圖6. 通過(guò)WB、電鏡和細胞感染實(shí)驗分別對比了Nereus LentiHERO? 純化前后慢病毒結構蛋白的完整性、顆粒形狀大小與感染活力均未受到顯著(zhù)影響。 Nereus LentiHEROTM兼具了產(chǎn)量、純度和時(shí)間效益 ? 一臺臺式離心機即可實(shí)現高通量病毒純化 ? 宿主細胞蛋白去除的同時(shí)樣品洗脫體積減?。饪s) ? 高純度、小體積樣品的進(jìn)一步濃縮更節省時(shí)間 Nereus LentiHERO? 性能總結 ? 一種新型基于納米纖維膜的AstreAdept? 技術(shù)為病毒載體純化工藝賦能 ? 易于操作的設計,實(shí)現了功能性慢病毒顆粒的快速純化和高回收率 ? 能顯著(zhù)降低如宿主細胞蛋白(HCP)等雜質(zhì)的含量 ? 可以同時(shí)處理多個(gè)樣品, 突破病毒載體開(kāi)發(fā)樣品制備的瓶頸 圖7. LV 純化高得率,高通量,高純度,適用于小體積慢病毒樣本,操作時(shí)間短。 綜上所述,該技術(shù)提供了一種更具成本效益和時(shí)間效率的方案,提高研究人員對新型細胞和基因治療項目的開(kāi)發(fā),助推新型生物治療藥物惠及廣大患者。 產(chǎn)品信息*: 品名 貨號 規格 Nereus LentiHEROTM NL100100 2 unit pack *采用相同技術(shù)適用于工藝放大的LentiHERO&reg; 1與LentiHERO&reg; 10預裝柱產(chǎn)品已上市,歡迎咨詢(xún)Astrea Bioseparations代理商北京西美杰科技有限公司。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué),擁有超過(guò)30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,是世界級層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過(guò)21個(gè)生產(chǎn)工藝通過(guò)了FDA和EMA的批準。Astrea在希臘語(yǔ)中是“星際少女”的意思,象征著(zhù)正義、純真、純潔和精確。使用Astrea Bioseparations這個(gè)名字體現了我們在工作中對純潔、精確和人性一如既往的關(guān)注。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地,專(zhuān)注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù),解決了傳統生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問(wèn)題,實(shí)現更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過(guò)程,完全符合當今生物治療創(chuàng )新的需求。 北京西美杰科技有限公司是Astrea Bioseparations品牌在中國的一級代理商,如您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎隨時(shí)撥打西美杰客服熱線(xiàn)400-050-4006或登錄西美杰官網(wǎng)www.mm2332.com查詢(xún)訂購。 更多>

喜大普奔!Pfanstiehl D-甘露醇(注射用)CDE登記號已激活!

“ 熱烈祝賀Pfanstiehl品牌D-甘露醇(注射用/M-109-7)CDE注冊登記號F20190000351已激活!”甘露醇是一種糖醇,通常由甘露糖還原而來(lái),是山梨醇的同分異構體,易溶于水,為白色結晶性粉末,有類(lèi)似蔗糖的甜味。甘露醇是一種很普遍的蛋白質(zhì)凍干保護劑。甘露醇對蛋白質(zhì)的保護作用與其濃度、形態(tài)結構密切相關(guān)。通常認為無(wú)定型甘露醇具有穩定蛋白質(zhì)的作用而結晶態(tài)的甘露醇則失去保護功能。甘露醇的純度對其保護蛋白質(zhì)的穩定性至關(guān)重要。 Pfanstiehl品牌D-甘露醇,秉承一貫高品質(zhì)理念,按照ICHQ7質(zhì)量體系生 產(chǎn),具有高純度,超低內毒素,超低微生物含量的特點(diǎn),并單獨檢測29種金屬離子含量(ppb水平),符合多國藥典,滿(mǎn)足生物制藥和疫苗對于注射級別甘露醇的生產(chǎn)要求。 產(chǎn)品信息: ·產(chǎn)品名稱(chēng): D-Mannitol(Plant Derived)High Purity/Low Endotoxin-Low Metals USP/EP/JP/ChP ·中文名稱(chēng):D-甘露醇·分子式:C6H14O6 ·分子量:182.17 g/mol ·CAS號:69-65-8 ·產(chǎn)品貨號:M-109-7產(chǎn)品特點(diǎn): ·超高純度,超低內毒素,低微生物含量,低金屬雜質(zhì)殘留 ·符合多國藥典:USP, EP, JP, ChP ·符合ICH Q3D標準 ·符合GMP注射級標準 ·植物來(lái)源 ·美國DMF號032464 ·中國CDE登記號F20190000351已激活產(chǎn)品應用: ·凍干保護劑 如果您對Pfanstiehl的D-甘露醇M-109-7感興趣,可聯(lián)系Pfanstiehl中國區代理北京西美杰科技有限公司獲得詳細的產(chǎn)品概況說(shuō)明文件如下。也歡迎聯(lián)系獲取測試樣品。 美國Pfanstiehl Inc.簡(jiǎn)介: Pfanstiehl Inc.成立于1919年, 公司總部位于美國芝加哥市北郊沃吉根工業(yè)區,是美國老字號企業(yè)之一,也是一家真正的cGMP生產(chǎn)商。作為一家有著(zhù)百年基業(yè)和沉淀的公司,Pfanstiehl Inc立志將產(chǎn)品質(zhì)量做到極致,是全球生物制藥領(lǐng)域超純糖類(lèi)、氨基酸類(lèi)以及其他尖端分子的領(lǐng)先生產(chǎn)商,迄今已服務(wù)全球蛋白藥、抗體藥、疫苗、mRNA及核酸類(lèi)藥物等領(lǐng)域100年以上。Pfanstiehl Inc. 超高純度、超低內毒素,超低金屬離子含量的輔料制劑產(chǎn)品,全面的技術(shù)和法規審計支持,真正的cGMP質(zhì)量控制體系,接受FDA的定期監察審計等都被國際知名生物制藥公司所認可。Pfanstiehl Inc.是全球超高純度、超低內毒素、超低金屬離子含量等注射級糖類(lèi)的領(lǐng)先制造商,產(chǎn)品生產(chǎn)均參照ICHQ7質(zhì)量體系。自2015年進(jìn)入中國市場(chǎng)以來(lái),Pfanstiehl Inc.已獲得13個(gè) CDE登記號,主要產(chǎn)品含括海藻糖,蔗糖,D-甘露醇,組氨酸,組氨酸鹽酸,精氨酸,精氨酸鹽酸,琥珀酸鈉,甲硫氨酸等,其中海藻糖F20170000098,甘蔗源蔗糖F20180001457和甜菜源蔗糖F20170000125, D-甘露醇F20190000351的CDE號均已激活。 Pfanstiehl Inc.于2023年又重磅推出注射級Tris和Tris HCl,這將是全球高質(zhì)量的Tris和Tris HCl。作為一家有著(zhù)百年歷史的企業(yè),Pfanstiehl Inc. 也在持續投資,不斷擴充產(chǎn)品管線(xiàn)和擴大生產(chǎn)產(chǎn)能,以滿(mǎn)足和支持全球生物制藥行業(yè)的快速發(fā)展,特別是更好的助力中國生物制藥的發(fā)展需求。北京西美杰科技有限公司為Pfanstiehl中國區代理,為客戶(hù)提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎撥打西美杰客服電話(huà)400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.mm2332.com了解更多信息。 更多>

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北京西美杰科技有限公司(Beijing XMJ Scientific Co.,Ltd,以下簡(jiǎn)稱(chēng)西美杰)于2006年成立,由留美歸國生物領(lǐng)域專(zhuān)業(yè)人士創(chuàng )辦。西美杰堅持自己的經(jīng)營(yíng)理念,勤奮踏實(shí)地整合全球產(chǎn)品資源與技術(shù)資源,為高校、科研院所的科研工作者以及生物制品生產(chǎn)企業(yè)提供一站式產(chǎn)品服務(wù)方案,幫助科研及企業(yè)單位縮短科研時(shí)間... 更多>

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