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1.項目名稱： SOD的抗?jié)冃越Y腸炎非臨床藥效學研究
2.標的技術的內容、技術指標和參數：見附件“SOD的抗?jié)冃越Y腸炎非臨床藥效學研究”實驗方案。
3.項目期限：項目開始時間預計為2022年5月，具體時間以雙方簽訂合同生效后為準，合作期限預計為一個月。
4.付款方式：按工作進度分兩期支付。
4.1合同簽訂生效后，30日內支付40%。
4.2完成SOD的抗?jié)冃越Y腸炎非臨床藥效學研究并出具報告后，10日內支付60%。
5.報價規(guī)定及投標資質：
5.1本項目投標報價需包括以下內容：
5.1.1根據招標文件說明所包括的一切研究項目內容。
5.1.2在合同實施期間因國家有關政策調整所可能需要的額外調整因素。
5.1.3參加議標編制投標報價所涉及的一切費用。
5.1.4如有優(yōu)惠項目請明確說明，重大缺漏項目按廢標處理。
5.2報價為含稅價，要求開具增值稅普通發(fā)票。
5.3本次招標采取一次性報價方式，并設置最高限價10萬元，總報價超過10萬元的按廢標處理。
5.4投標機構應通過國家藥物GLP認證。
6.評標辦法：
6.1滿足招標文件要求，以總價最低確定中標候選人。但如有故意壓低價格的行為，或出現重大錯漏報，將作為廢標處理。
6.2本次招標不存在按投標報價由低到高的排序遞補中標候選人的情況。若中標候選人放棄中標，則擇機另行安排。
7.開標時間、地點及參與方式：
7.1開標時間及地點：2022年2月18日在漳州水仙藥業(yè)股份有限公司會議室公開開標。
7.2參與方式：投標人應于投標截止時間前以現場遞交或郵寄方式參與投標，地址為：福建省漳州市薌城區(qū)南山路1號，漳州水仙藥業(yè)股份有限公司六樓招標辦，收件人：游志成，電話：13779911798。以郵寄投標文件方式參與投標的，快遞單上須注明投標單位名稱和參與的招標項目編號及項目名稱。開標之前為確保寄達，請事先與我司招標辦確認。投標截止時間：2022年2月17日17:30，逾期招標人有權拒收。
8.投標文件要求：
投標文件分成三部分，每部分應分開密封裝訂：第一部分為資格文件，第二部分技術文件，第三部分為商務文件。
8.1資格文件編制一式一份，主要內容為詳細的投標人資料，包括a.三證合一的《營業(yè)執(zhí)照》；b.非法人代表到現場投標的需提供法人代表授權書；c.招標文件對投標人資格要求的其他資料。
8.2技術文件編制一式二份，包括技術開發(fā)內容、技術參數、完成時間，招標文件要求提供的其它技術方面的文件，等等。
8.3商務文件編制一式一份，包括以下內容：投標報價表（必須由法人代表或被授權人簽字蓋章）、商務偏離表（如付款方式等，未說明即默認響應本招標文件要求），等等。
8.4除投標報價書外，其他任何地方不得出現相關投標標價的任何內容。
9其他：
9.1.投標費用：無論投標過程中的作法和結果如何，投標方自行承擔其所有與參加投標有關的全部費用。
9.2.投標文件和有關資料一律不退還。
9.3.投標文件和報價清單須經投標方單位蓋章方視為有效。
9.4.出現以下情況者，投標方的投標文件將作為廢標：
9.4.1.不符合我國法律、法規(guī)的投標文件。
9.4.2.虛報、謊報行為的投標。
9.4.3. “關于資格的聲明函”未提供或提供不全。
9.4.4.對招標文件中項目期未作出響應、或投標文件中項目期不明確、或項目期不能滿足招標方要求。
9.4.5.投標文件與招標文件規(guī)定的技術要求有嚴重不符合者。
9.5.解決合同糾紛的方式：雙方協(xié)商解決，協(xié)商不成的，由合同簽訂地人民法院判決。
10.評標小組：評標小組由水仙藥業(yè)公司有關部門人員組成。
11.聯(lián)系方式：
招標辦 游先生：0596-2302616 / 13779911798
技術交流 康穎：18811568072
招標人：漳州水仙藥業(yè)股份有限公司
2022年2月11日
附件一：
投標單位法定代表人授權書
項目名稱：
日 期：
至： （招標單位名稱）
（投標單位名稱），中華人民共和國合法企業(yè)，法定地址：
（授權人姓名）特授權 （被授權人姓名）代表我公司全權辦理針對上述項目的投標、談判、簽約等具體工作，并簽署全部有關的文件、協(xié)議及合同。
我公司對被授權人的簽名負全部責任。
在撤銷授權的書面通知以前，本授權書一直有效。被授權人簽署的所有文件（在授權書有效期內簽署的）不因授權的撤銷而失效。
授權人簽名： 被授權人簽名：
職務： 職務：
投標單位（公章）
“SOD的抗?jié)冃越Y腸炎非臨床藥效學研究”實驗方案
本實驗擬采用兩種化學造模法：DSS（葡聚糖硫酸鈉）、OXZ（惡唑酮）。陽性對照選用口服給藥的SASP（柳氮磺吡啶），或者直腸給藥的5-ASA（5-氨基水楊酸、美沙拉嗪）。
1. DSS造模條件下口服TAT-SOD對潰瘍性結腸炎（簡稱UC）大鼠的改善作用
1.1動物實驗
選取SD雄性大鼠至少36只，初始體重約220 g，隨機分成6組，每組至少6只，分別為模型組、正常組、高、中、低劑量L-TAT-SOD（TAT-SOD脂質體）組和陽性對照組。造模期間，正常組自由飲用滅菌水，其余組大鼠連續(xù)7天自由飲用3.0 %（m/V）葡聚糖硫酸鈉（dextra sulfate sodium，DSS），構建急性結腸炎大鼠模型。造模成功后，連續(xù)7天分別給予每只用藥大鼠高、中、低劑量灌胃給藥，所對應劑量分別為30000 U/kg、10000 U/kg 及3000 U/kg。實驗分組如下：模型組，全程飲用含3% DSS 滅菌水+灌胃生理鹽水；正常組，全程飲用不含DSS滅菌水+灌胃生理鹽水；L-TAT-SOD組，全程飲用含3% DSS滅菌水+灌胃L-TAT-SOD；陽性對照組，全程飲用含3% DSS滅菌水+灌胃500 mg/kg SASP。
1.2 結腸損傷評價（DAI評分）
通過疾病活動指數（disease activity index，DAI）評價大鼠的結腸損傷情況：每天記錄大鼠體重、排便情況，評分后取平均值得出結腸炎模型大鼠DAI評分以及其變化趨勢。
表1 DAI評分
|
評分 |
體重下降 |
大便形態(tài) |
血便 |
|
0 |
0 |
正常 |
正常 |
|
1 |
1~5 |
松散 |
隱血陽性 |
|
2 |
5~10 |
||
|
3 |
10~15 |
腹瀉 |
肉眼血便 |
|
4 |
＞15 |
DAI評分的計算公式為：
DAI=（體重下降+大便形態(tài)+血便）÷ 3。
1.3 結腸密度的測定
給藥7天后，解剖大鼠腹腔，找到結腸，位于回盲以下 2 cm處向下取材約10 cm至肛門以上2~3 cm。然后立即稱重、測量長度。注意：取材過程中盡量不要破壞組織的完整性，盡量避免拉扯組織，保證組織的本身長度。
結腸密度以所取結腸的重量與長度的比值計算。
結腸密度（g/mL）＝組織重量（g）÷ 組織長度（cm）
1.4 結腸組織的HE染色
取大鼠結腸組織做固定、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色，再于顯微鏡下觀察。具體步驟見參考文獻[26]。
1.5 血清及結腸組織樣品制備
從大鼠腹主動脈取血并按照鹽酸羥胺法測血清中酶活與炎癥細胞因子，具體步驟見試劑盒說明書。
收集血液于1.5mL Ep管中。室溫靜置1h后，以4,000rpm，4℃條件離心15min，吸取上清液血清，做好相應標記且分裝后置于-80℃冰箱保存，以待后續(xù)促炎細胞因子與抗氧化指標測定，需避免反復凍融。
10%結腸組織勻漿上清液的制備：準確稱取結腸組織并記錄重量（mg），加入9倍的預冷生理鹽水（μL），勻漿儀徹底研磨后以3,000rpm，4℃條件離心10min留取上清液，做好相應標記并分裝后置于-80℃冰箱保存，以待后續(xù)促炎細胞因子與氧化應激相關指標測定，需避免反復凍融。
采用免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)對結腸組織的緊密連接蛋白Occludin與ZO-1的表達量進行測定，以1.4步驟制備石蠟切片，其余步驟如下：切片脫蠟后修復抗原，以3%H2O2孵育后于組化圈內進行血清封閉，滴加一抗以4℃條件孵育過夜，滴加二抗以室溫條件孵育50min，滴加DAB顯色液使目的蛋白顯現陽性信號，以蘇木素復染細胞核后脫水透明，并以中性樹膠封片后鏡檢，采集IHC切片圖像信息。
IHC切片圖像中目的蛋白呈棕褐色陽性表達，參照Yang等[248]的方法，利用Image Pro-Plus v.6.0軟件測定積分光密度與組織面積（n=6），二者比值平均光密度作為量化分析結腸組織切片中目的蛋白表達的指標。
對已獲得的小鼠血清，采用鹽酸羥胺法測定其SOD酶活，具體操作步驟同南京建成生物工程研究所試劑盒。
對已獲得的組織勻漿上清液，采用BCA試劑盒方法測定其中蛋白質含量。對組織勻漿上清液進行一定倍數的稀釋后，采用南京建成試劑盒方法測定六項氧化應激相關指標SOD、CAT、MDA、GPx、GSH、GSSG與MPO的含量。
1.8促炎細胞因子的測定
采用Elabscience ELISA試劑盒方法進行測定大鼠血清與組織勻漿上清液中促炎細胞因子TNF-α、IL-6與IL-1β的含量。
采用Excel 2010、SPSS 25和GraphPad Prism 8軟件對實驗數據進行分析處理，結果以“平均值±標準誤差（M±SEM）”進行表述，進行單因素方差分析（ANOVA）并進行Duncan檢驗，以p＜0.05為顯著性差異。
2. OXZ造模條件下口服TAT-SOD對潰瘍性結腸炎（簡稱UC）大鼠的改善作用
本項造模實驗除造模方法不同外，其它方法參考DSS法。
OXZ 法誘導的實驗性結腸炎動物模型的建立*: 大鼠背部皮膚剃毛( 2 cm × 2 cm) ，剃毛處滴3%的OXZ( 溶解于100%乙醇) 0.2 mL，自然風干，1 d后重復1次，5 d后將直徑 2 mm 的無菌聚乙烯管插入大腸約 8 cm， 灌入0.5% OXZ( 溶解于50%乙醇) 0.15 mL，注入后大鼠倒置 1 min， 防止倒流。待清醒后正常喂養(yǎng)， 正常對照組注入生理鹽水［9］。
* 胃腸病學和肝病學雜志 2013 年 12 月第 22 卷第 12 期, DSS、TNBS、OXZ 誘導結腸炎動物模型的對比。
